RPMI1640完全培養基是豐富的配方，廣泛應用于哺乳動物細胞。它們是為人類白血病細胞的懸浮培養或單層培養而配制的。在免疫細胞與腫瘤細胞共培養實驗中，由于脾臟是機體免疫器官，含有大量的淋巴細胞和巨噬細胞，是機體細胞免疫和體液免疫的中心。腫瘤免疫治療在臨床治療腫瘤過程中顯示出的巨大潛力，使其成為腫瘤治療研究領域的后起之秀，已逐步發展為繼手術、放療和化療之后的第四大治療方法。
小鼠脾細胞的提取分離培養步驟：
1.C57BL/6小鼠（6~8周）頸椎脫臼處死，迅速放入75%乙醇（v/v）浸泡5分鐘，取出，置于超凈臺內的無菌培養皿中；
注意：后面所有操作均在超凈臺內完成，保持無菌操作。
2.用鑷子夾起小鼠腹部皮膚，在小鼠左腹側中部剪開小口，撕開皮膚，即可見紅色長條狀脾臟；
3.用鑷子輕輕提起脾臟，用眼科剪分離脾臟下面的結締組織，取出脾臟，放入盛有5mLRPMI1640完全培養基的無菌培養皿中；
4.將脾臟用眼科剪輕輕剪碎后，置于200目的細胞篩網上，用10mL注射器針芯輕輕研壓脾臟，擠壓完成后，吸取少量RPMI1640培養基沖洗細胞篩網，將脾細胞懸液沖洗至培養皿中；
注意：此步驟中所用的鑷子與步驟3中的鑷子分開使用。10mL注射液針芯采用一次性無菌包裝的注射器；
5.用無菌移液管吸取培養皿中的脾細胞懸液，放入50mL無菌離心管中；
6.4℃條件下300×g離心5min，去上清，加入5mL紅細胞裂解液，用移液管輕輕吹打均勻后，室溫下裂解2分鐘（保持輕輕振搖），加入15mLPBS混勻，4℃條件下300×g離心5min后棄上清，用PBS洗2遍，收集細胞，用RPMI1640完全培養基（含10%FBS，下同）重懸細胞；
7.用RPMI1640完全培養基調整細胞濃度為5.0×106cells/mL，備用。
