RPMI1640完全培養基(含胎牛血清15%)的產品特點:三次無菌過濾,輻射滅菌,批次新,保質期久,貼壁效果好,增殖效率高。起初是為淋巴細胞培養專門設計的,其含有多類細胞培養所需的氨基酸、維生素、無機鹽等多種成分,但不含蛋白質、脂類或者任何生長因子,需搭配血清和無血清添加物使用。
RPMI全稱為Roswell Park Memorial Institute,指的是洛斯維·帕克紀念研究所。RPMI是這個研究所研發的一類細胞培養基,1640是培養基代號。RPMI-1640培養基是Moore等人于1967年在Roswell Park Memorial Institute研制,針對淋巴細胞培養設計,含BSS+21種氨基酸+維生素11種等,F在已經廣泛應用于各種正常細胞和癌細胞的培養,尤其是懸浮細胞的培養,是使用廣泛的培養基之一。
RPMI1640完全培養基制備時需要在無菌室內進行操作,取配培養液專用的2500ml廣口立瓶,加入在室溫保存的3、天內新蒸餾的雙餾水1800ml;加入2袋RPMI1640干粉培養基,輕輕振搖使之分散。不要加熱。用5ml槍(槍頭需高壓滅菌)吸取蒸餾水沖洗包裝袋內部,轉移全部的痕量干粉到容器內。精確稱取4000mg NaHCO3加到容器中。加雙蒸水至總體積為1950ml,振搖使溶質充分溶解。用5ml槍(槍頭需高壓滅菌)取小樣測溶液pH值。用已過濾除菌的1N NaOH或1NHC1調節pH值至7.1±0.1。注意緩慢滴加,邊滴加邊振搖。
RPMI1640完全培養基使用注意事項:
1、因RPMI1640中含有的谷氨酰胺半衰期短,只有1~3周,故新配制的培養基使用2周后,再使用時,應臨時補加谷氨酰胺。補加辦法:
1)100倍濃縮的谷氨酰胺液使用時加入培養液總體積的1/100。
2)100倍濃縮谷氨酰胺溶液(200mmol/L)的配制:2.9222g谷氨酰胺,加雙餾水至100ml,充分攪拌溶解后,過濾除菌。分裝小青瓶(每瓶5~10ml)。-20C貯存。
2、放入CO2培養箱中的培養瓶,務必將瓶蓋旋松(只搭上1扣即可),以使CO2氣體能夠進入培養瓶中。